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复方免疫增强剂

发布时间：2010-07-27 来源：东方澳龙·研发部

复方免疫增强剂

一、选题目的、依据

近年来，随着人们对多糖的研究的深入，发现多糖具有多方面的生物活性与功能。黄芪多糖是从中药黄芪中提取、分离、纯化所得有效部位，因其在增强机体免疫力、降血糖、抗衰老方面有较强的活性而备受关注。

从蒙古黄芪根的水提取液中得到两种葡聚糖AG-1和AG-2。并分得两种杂多糖AH-1和AH-2。经药理研究AG-1和AH-1两种多糖具有某些免疫促进作用。后来又从此植物分得黄芪多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，黄芪多糖Ⅱ、Ⅲ均为葡聚糖，其中黄芪多糖Ⅰ和Ⅱ又增强免疫活性的作用。近期又分得酸性多糖AMos-S,亦有增强免疫功能作用。临床实验表明：黄芪多糖具有刺激骨髓造血和增强免疫功能的作用。免疫方面：1、体外实验表明：黄芪多糖能够刺激小鼠脾脏细胞的增殖和人外周血单核细胞分泌多种细胞因子。2、体内实验表明：黄芪多糖可增强正常小鼠、受免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能：促进血清溶血素形成；提高空斑形成细胞的溶血能力及碳粒廓清作用；增强DNFB诱发的小鼠NK细胞的活性和IL-2的产生。造血方面：体外实验表明，黄芪多糖可促进小鼠骨髓基质细胞的增殖；促进小鼠骨髓中性粒细胞和骨髓巨核细胞的增殖和成熟；对受5-氟尿嘧啶或丝裂霉素C化疗或X光辐射的小鼠，黄芪多糖可促进其骨髓造血祖细胞或脾脏前体细胞的增殖与成熟，并促进其外周血白细胞红细胞

和血小板的回升。

盐酸左旋咪唑化学名称为(S)-(-)-6-苯基-2,3,5,6-四氢咪唑并[2,1-b]噻唑盐酸盐，具有明显的免疫调节功能，通过刺激淋巴组织的T细胞系统，增强淋巴细胞对有丝分裂原的反应，提高淋巴细胞活性物质的产生，增加淋巴细胞的数量。并增加巨噬细胞和嗜中性细胞的吞噬作用，从而对宿主具有明显的免疫兴奋作用。现公认左旋咪唑的免疫调节活性作用机理存在3个方面：一是左旋咪唑具有拟胆碱能样活性，与咪唑基团有关；二是左旋咪唑能诱导机体产生各种淋巴因子；三是左旋咪唑的代谢产物具有清除自由基的功能。

盐酸左旋咪唑是良好的免疫调节剂，可提高T-淋巴细胞活性物质的产生，增加淋巴细胞的数量，增加巨噬细胞和嗜中性细胞的吞噬作用，而黄芪多糖可促进细胞生长旺盛，增强吞噬细胞的吞噬功能。这两种药物协同作用，可提高畜禽机体的免疫能力，增强对抗病毒能力。

二、黄芪多糖的提取工艺

称取黄芪饮片，加水“8、6倍量，”分别煮沸1小时、40分钟。过滤，合并2次滤液，浓缩至1：1（1克生药相当于1毫升），加3倍量的95%乙醇沉淀，放置12小时以上，离心，沉淀蒸干。加水溶解，离心。取上清液，再加3倍量95%乙醇沉淀，冷藏后离心，沉淀物蒸干。

三、药理学实验

（一）黄芪多糖：

1、调节免疫

（1）对非特异性免疫的作用黄芪水煎剂及口服液25，50g/kg连续7d给小鼠灌胃没，能明显提高小鼠网状内皮系统的吞噬功能，并对氢化可的松抑制的网状内皮系统的吞噬功能有明显提高；能提高吞噬细胞吞噬肌红细胞及白色葡萄球菌能力。

（2）对细胞免疫的作用黄芪可使小鼠成熟T细胞数增多，使其前身细胞即自然杀伤细胞（NK）活力下降；黄芪有促进小鼠对病毒诱生干扰素的能力，从而抑制病毒繁殖。黄芪水煎剂0.5ml/(只·d) 灌胃，对大黄脾虚小鼠的白细胞介素2（IL-2）低下有明显提高作用并使其恢复正常，黄芪多糖50，200mg/ml，体外试验使大黄脾虚小鼠Con A活化淋巴细胞IL-2的产生有促进作用，对正常小鼠无效。

（3）对体液免疫的作用黄芪水煎剂及黄芪多糖、皂苷等对正常机体的抗体生成有明显促进作用。黄芪水煎剂0.3g/只，7d给小鼠灌服，可使溶血空斑数（PFC）等显著升高，黄芪多糖800mg/kg也显著提高形成抗体的细胞数。

2、抗应激

（1）增强细胞代谢黄芪可使地鼠和小鼠肾细胞的生长旺盛，活细胞明显增多，次溶酶体髓模样结构增多，糖原颗粒及相关酶增加。

（2）黄芪多糖使小鼠脾脏、肝脏等RNA增加，可能是使其酶（RNA酶）活力降低造成RNA代谢分解降低。

（3）黄芪煎剂及皂苷甲可提高小鼠血浆及组织内环核苷酸（cAMP）和cGMP的含量（抑PDE）。

（二）盐酸左旋咪唑

盐酸左旋咪唑具有明显的免疫调节功能，即能使免疫缺陷或免疫抑制的动物恢复其免疫功能，但对正常机体的免疫功能作用并不显著。它通过刺激淋巴组织的T细胞细胞，增强淋巴细胞对有丝分裂原的反应，提高淋巴细胞活性物质的产生，增加淋巴细胞数量，并增强巨噬细胞和嗜中性白细胞的吞噬作用，从而对宿主具有明显的免疫兴奋作用。

盐酸左旋咪唑内服、肌内注射吸取迅速和安全。犬内服的生物利用度为49％～64％，达峰时间约为2～4.5h；猪内服及肌肉注射的生物利用度分别为62％和83％，此外，还可通过皮肤吸取。主要通过代谢消除，原形药（少于6％）及代谢物从尿中排泄，小部分随粪便排出。消除半衰期有明显的种属差异：牛4～6h，羊3.7h，猪3.5～9.5h，犬1.3～4h，兔0.9～1h[6]。

盐酸左旋咪唑的组织残留不多，用药后12～24h，组织中残留仅占给药量的0.9％，而且主要存在于肝、肾这些排泄和降解器官内。据大鼠及其他动物试验证实，给药7天后，肌肉、肝、肾、脂肪、血液及尿液中已无药物残留。而且，目前已证实盐酸左旋咪唑代谢产物的毒性远低于母体药物。因此组织残留只要分析盐酸左旋咪唑这种母体药物即可。

四、毒理试验

（一）盐酸左旋咪唑（levamisole hydrochloride）：

口服：小鼠，LD50是223mg/Kg ；

大鼠，LD50是180mg/Kg。

（二）黄芪煎剂：

腹腔注射：小鼠，LD50是（40±5）g/Kg。

五、稳定性研究

将带包装的盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉（100 g：盐酸左旋咪唑（C11H12N2S·HCl）5g与黄芪多糖8g）样品3个批号，分别进行强光照射试验考察，加速试验及长期留样考察。考察项目有外观、含量等。

含量测定方法: 盐酸左旋咪唑高氯酸滴定法

黄芪多糖苯酚-硫酸法

（一）光照试验: 将样品置针剂澄明度检测仪下，调节照度至符合要求。

条件与设备：针剂澄明度检测仪

温度25℃ ，照度4500±500LX，光照时间 10天。结果见表一。

（二）加速试验：

条件：温度40±2℃（恒温箱） RH 75±5%

将带有包装的样品于上述条件下放置6个月，每隔1个月检测一次，结果见表二。

（三）长期试验（有效期考察试验）：

条件：温度25±2℃ RH 60±5%

时间0—18个月，结果见表三。

结论：盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉（100 g：盐酸左旋咪唑（C11H12N2S·HCl）5g与黄芪多糖8g）稳定性试验，采用三批样品进行了光照试验考察、加速试验及室温留样考察，进行了外观、含量变化考察。上述试验结果如下：

1.光照试验：带包装的盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉，对光性质较稳定，应遮光，密闭保存。

2. 加速试验：带包装的盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉，在温度40±2℃，相对湿度75±5%的条件下放置六个月，稳定性较好，可以申报生产。

3.长期试验: 带包装的盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉在25±2℃，相对湿度60±5%条件下放置18个月，进行统计分析，暂定药品的有效期两年。

综上所述：盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉（100 g：盐酸左旋咪唑（C11H12N2S·HCl）5g与黄芪多糖8g）遮光，密闭保存，性质稳定。

表一光照试验

项目批号	时间	盐酸左旋咪唑含量(%)	黄芪多糖含量(%)	外观色泽及均匀度
021101	0天	100.9	101.2	黄白色颗粒状粉末
	5天	100.8	101.2	黄白色颗粒状粉末
	10天	100.6	101.0	黄白色颗粒状粉末
021102	0天	100.2	101.0	黄白色颗粒状粉末
	5天	100.0	100.8	黄白色颗粒状粉末
	10天	99.9	100.5	黄白色颗粒状粉末
021103	0天	100.5	100.7	黄白色颗粒状粉末
	5天	100.3	100.5	黄白色颗粒状粉末
	10天	100.2	100.4	黄白色颗粒状粉末

表二加速试验

项目批号	时间	盐酸左旋咪唑含量(%)	黄芪多糖含量(%)	外观色泽及均匀度
021101	0月	100.9	101.2	黄白色颗粒状粉末
	1月	99.7	100.8	黄白色颗粒状粉末
	2月	98.9	100.5	黄白色颗粒状粉末
	3月	98.2	100.1	黄白色颗粒状粉末
	4月	97.5	99.7	黄白色颗粒状粉末
	5月	96.6	99.6	黄白色颗粒状粉末
	6月	95.8	99.1	黄白色颗粒状粉末
021102	0月	100.2	100.8	黄白色颗粒状粉末
	1月	99.0	100.3	黄白色颗粒状粉末
	2月	98.1	99.9	黄白色颗粒状粉末
	3月	97.3	99.6	黄白色颗粒状粉末
	4月	96.5	99.4	黄白色颗粒状粉末
	5月	95.6	98.9	黄白色颗粒状粉末
	6月	94.8	98.7	黄白色颗粒状粉末
021103	0月	100.5	100.7	黄白色颗粒状粉末
	1月	101.5	100.3	黄白色颗粒状粉末
	2月	100.3	99.9	黄白色颗粒状粉末
	3月	99.2	99.5	黄白色颗粒状粉末
	4月	98.4	99.3	黄白色颗粒状粉末
	5月	97.6	98.6	黄白色颗粒状粉末
	6月	96.8	98.2	黄白色颗粒状粉末

表三长期试验

项目批号	时间	盐酸左旋咪唑含量(%)	黄芪多糖含量(%)	外观色泽及均匀度
021101	0月	100.9	101.2	黄白色颗粒状粉末
	3月	101.2	100.7	黄白色颗粒状粉末
	6月	99.9	100.3	黄白色颗粒状粉末
	9月	98.7	99.5	黄白色颗粒状粉末
	12月	97.5	98.3	黄白色颗粒状粉末
	18月	95.3	97.4	黄白色颗粒状粉末
021102	0月	100.2	100.8	黄白色颗粒状粉末
	3月	100.6	100.3	黄白色颗粒状粉末
	6月	99.4	99.8	黄白色颗粒状粉末
	9月	98.2	99.1	黄白色颗粒状粉末
	12月	97.0	98.3	黄白色颗粒状粉末
	18月	94.7	97.5	黄白色颗粒状粉末
021103	0月	100.5	100.7	黄白色颗粒状粉末
	3月	101.3	99.9	黄白色颗粒状粉末
	6月	100.1	99.0	黄白色颗粒状粉末
	9月	98.9	98.2	黄白色颗粒状粉末
	12月	97.6	97.5	黄白色颗粒状粉末
	18月	95.4	96.6	黄白色颗粒状粉末

盐酸左旋咪唑、黄芪多糖可溶性粉（100 g：盐酸左旋咪唑（C11H12N2S·HCl）5g与黄芪多糖8g）021101、021102、021103三批，在25±2℃,相对湿度60±5%条件下放置18个月，进行统计分析，有效期分别为28.0个月、27.0个月、28.0个月。

综上三批，本品的有效期可暂定为两年。

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